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ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項
點擊次數:506 發布時間:2020-10-15
   一、ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項:
  1、ABI7500熒光定量PCR儀目的條帶很亮,但是邊沿不清楚,前後有拖尾現象。出現這樣的問題,則需要進行細致的分析,因為引起該問題的可能很多。
  2、可先檢查是否模板質量問題,如有降解等,模板應避免反複凍融。也有可能是抽提RNA時有汙染,則需要重新抽提RNA。
  3、此外,也可能是非特異性擴增引發該問題,可提高退火溫度,少循環次數。電泳緩衝液時間太長,ph值和鹽離子濃度明顯改變、電泳時電壓太高、電泳液過久沒換,電泳膠髒了等都可能引發該問題。
  4、如果不是由上述原因引起,則進一步檢查加樣量是否過大,製膠過程中膠孔是否製好,EB是否衝洗幹淨、模板中是否混有基因組DNA或蛋白等。也需考慮是否擴增的條件不合適。針對具體原因再采取相應的措施。
  5、PCR產物何時需要用凝膠純化,何時不需要?當凝膠分析擴增產物隻有一條帶時,則不需要使用凝膠純化。當可見其他雜帶時,則可能是積累了大量引物的二聚體,在克隆前需要做凝膠純化。
  6、如果實驗中沒有回收到目的片段,則需要繼續進行對照實驗。包括塗布未轉化的感受態細胞、轉化完整質粒,計算菌落生長數,測定轉化效率、用標準載體,連接對照,轉化高頻率感受態細胞,按照的實驗步驟進行。
  7、實驗中出現假陽性擴增該怎麽辦?這是擴增係統受到汙染的表現,應通過檢查排除汙染源。先考慮是否為試劑汙染,可將試劑分裝好直接置於PCR儀中擴增進行判斷。
  8、其次要考慮是否為實驗室汙染,可更換所用的移液器、吸咀管(離心管)等,將試驗中的關鍵步驟轉移到一個新的環境中,判斷是否為實驗室汙染。
  9、如果是則需要對整個實驗室及實驗器材徹底清洗處理,保持良好的通風、清潔等。此外,還要考慮是否為采樣汙染,一般表現為一批結果陽性率很高,一批結果陽性率又下降很多,如此反複。解決方法為盡量使用一次試管及吸咀取樣。
  總結:ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項小編就分享到這了,看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧!總的來說,希望對大家有所幫助。